Introdução: Dentre as principais doenças que atingem a pecuária leiteira, a mastite bovina encontra-se como uma importante enfermidade, pois gera prejuízos a produtores de leite e laticínios. Em decorrência disso, foi realizada pesquisa microbiológica de amostras de leite de vacas que apresentavam mastite em quatro fazendas da região de Formiga-MG, no ano de 2022, para pesquisa do acometimento de diferentes agentes etiológicos presentes nas propriedades da região. Objetivo: Buscar os principais agentes etiológicos causadores de mastite em fazendas da região de Formiga-MG. Materiais e Métodos: Nas quatro fazendas, foram amostrados leites de 29 vacas onde 12 apresentaram mastite ambiental, 15 com mastite contagiosa e 2 amostras não apresentaram crescimento. O plaqueamento das amostras coletadas foi realizado em meios cromogênicos próprios para identificação do agente etiológico da mastite (SmartColor2 da OnFarm®), seguida de incubação a 36˚C por 48 horas. Resultados: Constatou-se presença de Streptococcus dysgalactiae (33%), Streptococcus uberis (7,5%), Staphylococcus aureus (33%), Staphylococcus não aureus (7,5%), Streptococcus agalactiae (15%), Escherichia coli (4%). Conclusão: Os agentes etiológicos mais encontrados na região de Formiga-MG foram Streptocccus dysgalactiae e Staphylococcus aureus, indicando etiologia multifatorial na região, o que demonstra um desafio tanto para o produtor quanto para o profissional.