Introdução: A principal forma de transmitir informações entre estruturas do sistema nervoso ocorre por liberação de neurotransmissores. Um dos principais neurotransmissores é a acetilcolina (ACh). Sua liberação depende da ação de um transportador vesicular de acetilcolina (VAChT). Nosso grupo já demonstrou que o VAChT é fosforilado; e que esta fosforilação aumenta o seu tráfego para terminais nervosos. O direcionamento de proteínas para as vesículas dos terminais nervosos pode seguir dois trajetos: 1) ir direto para as membranas de vesículas localizadas nesses terminais; 2) passar pela membrana celular antes de ser incorporado às vesículas. Objetivos: Determinar o tráfego seguido pelo VAChT em células PC12, através de mutações que neutralizam um motivo di-leucina presente na região C-terminal do transportador (L485A, L486A); dessa forma sua endocitose mediada por dinamina fica comprometida, fazendo o VAChT se acumular na primeira membrana do terminal em que for direcionado. E, finalmente, para verificar se a fosforilação do VAChT poderia alterar esse direcionamento, forma construídos dois mutantes do VAChT:  S480E-L485A-L486A (mutante que mimetiza o VAChT fosforilado e que não pode ser endocitado por dinamina) e S480A-L485A-L486A (mutante que não pode/ ser fosforilado, nem endocitado por dinamina). Materiais e Métodos: As mutações na região C-terminal do VAChT foram realizadas por PCR, e os mutantes obtidos foram clonados no vetor de expressão EGFP (GFP-VAChT L485A/L486A). Células PC12 foram transfectadas com esses vetores, e as imagens foram obtidas através de microscopia confocal. Para as análises estatísticas foi utilizada a distribuição de Poisson, com nível de significância de 5% (0,05). Resultados: nas células (n=16) tranfectadas com o mutante GFP-VAChT S480A-L485A-L486A a fluorescência se acumulou na membrana do corpo celular. Já nas células (n=16) transfectadas com o mutante GFP-VAChT S480E-L485A-L486A, observou-se que, mesmo perdendo o motivo di-leucina, o GFP continua direcionado para as varicosidades das células. Esse resultado indica que a fosforilação do VAChT influencia no seu direcionamento direto para os terminais nervosos de células PC12. Conclusão: A fosforilação do VAChT provoca alterações em seu direcionamento intracelular em células PC12. Isso sugere que alterações na neurotransmissão podem ser decorrentes de direcionamentos alternativos de proteínas importantes para os passos da neurotransmissão.